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紫外分光光度法在測定蛋白質含量時的實驗原理

更新時間:2022-02-21 點擊次數:2337

由于蛋白質分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵,因此蛋白質具有吸收紫外線的性質,吸收高峰在280nm波長處。在此波長范圍內,蛋白質溶液的光吸收值(OD280)與其含量呈正比關系,可用作定量測定。


利用紫外吸收法測定蛋白質含量的優點是民迅速、簡便、不消耗樣品,低濃度鹽類不干擾測定。因此,在蛋白質和酶的生化制備中(特別是在柱層析分離中)得到廣泛應用。


此法的缺點是:(1)對于測定那些與標準蛋白質酪氨酸和色氨酸含量差異較大的蛋白質,有一定的誤差;(2)若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外線的物質,會出現較大的干擾。根據蛋白質和核酸的吸收高峰不同,并利用這一性質,通過計算可以適當校正核酸的干擾作用。




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